设计的引物Tm值为50和55,退火温度应该在这个值上减5度还是减10度啊?

设计的引物Tm值为50和55,退火温度应该在这个值上减5度还是减10度啊? 我的引物设计有30个碱基,tm值分别为88和84,是不是太高了?那退火温度怎么设定啊? 关于退火温度与引物Tm~我用PP5做的引物发现引物Tm值比退火温度低 这很奇怪啊,做PCR是不是退火温度一定要比Tm高呢? 带酶切位点的引物设计问题带酶切位点的引物设计时计算Tm值,退火温度及GC含量时是否要把酶切位点和保护碱基计算在内?我觉得不用,因为酶切位点可以不用跟模板结合, TAILPCR 反应体系中退火温度一般是多少 和特异引物的TM值有什么关系吗 为什么做PCR设定引物退火温度时设定的退火温度要比合成引物得到的引物Tm值低几度? 用primer 5.0 设计引物的时候,哪个才是真正的PCR产物退火温度Tm,看哪个? 退火温度与引物的TM值有什么联系?为什么退火温度要比TM低5度左右最合适? 请教如何计算出兼并引物的退火温度我是一个新手,如何根据公司送来的兼并引物的单子上的Tm值推出实际PCR时的退火温度呢?引物单子上有两个Tm值,分别是1M 钠离子,50mM钠离子条件下的Tm值.实 退火温度低会对PCR产生什么影响?我做菌落PCR,使用一个特异性上游引物和一个T7下游通用引物,退火温度用的是较低的48度,但引物的Tm分别为57,71,阳性对照都没有出结果,请问是怎么回事呢?退火 引物的退火温度如何计算,用tm值减去5度,靠谱不?用1m na+的还是50mmna+? 假设我有一个引物,上游引物Tm为65.2℃,下游为64.6℃.请问怎样设计退火温度梯度, 求助巢式PCR退火温度的设定我最近准备做巢式PCR,下游引物用oligo dT,上游用两个基因特异性引物,但上游的两个引物和下游的oligo dT相比,Tm值差了将近10度,这样退火温度怎么设定呢? PCR扩增1829BP的片段,一对引物的Tm都是64度,退火温度已经试过55和50度都没有目的条带,请教pcr设置参数在55和50度只看到引物二聚体且有拖尾现象,没有目的条带 带酶切位点的引物设计时计算Tm值,退火温度及GC含量时是否要把酶切位点和保护碱基计算在内?我觉得不用,因为酶切位点可以不用跟模板结合, 询问PCR退火温度设计引物单上数据如下上游TTACAAGATGGAGCCTCACC（GC含量50%）Tm（1M Na+）：68.2Tm（50mM Na+）：46.6下游CAAAGAATAACCCAGGACGA（GC含量45%）Tm（1M Na+）：66.2Tm（50mM Na+）：44.6顺便问下大家,Tm（1 关于引物的退火温度?为什么用公式计算的引物退火温度和试剂公司送来的合成报告单上的退火温度不一致? 我设计了引物,结果生物公司合成的引物退火温度比我设计的低10度,为什么,我用哪个退火温度